Cryptosporidium diagnosis in different groups of children and characterization of parasite species

ABSTRACT Background: Microscopy and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) are routinely used for Cryptosporidium diagnosis, without differentiating the parasite species. Methods: Children's feces were analyzed by modified Ziehl-Neelsen (mZN) and ELISA for Cryptosporidium diagnosis and by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism for species identification. Results: Cryptosporidium frequency was 2.6%. The sensitivity and specificity of ELISA were 85.7% and 99.7%, respectively, with excellent concordance with mZN (kappa=0.854). Parasite species were characterized as Cryptosporidium hominis (78.3%), Cryptosporidium felis (17.4%), and Cryptosporidium parvum (4.3%). Conclusions: Coproantigen ELISA is as efficient as mZN for Cryptosporidium diagnosis. Cryptosporidium genotyping suggests anthroponotic and zoonotic transmission to children.

Perfil epidemiológico das parasitoses intestinais em moradores de uma comunidade da Ilha de Boipeba, Bahia, Brasil / Epidemiological profile of intestinal parasites in residents of a community on the island of Boipeba, Bahia, Brazil

Introdução: as parasitoses intestinais constituem-se um importante problema de saúde pública mundial. Estas infecções são mais prevalentes em regiões tropicais impactando na morbimortalidade e aumento nos custos para o sistema de saúde. Objetivo: avaliar a prevalência das enteroparasitoses e sua associação com as condições socioeconômicas, sanitárias, ambientais e hábitos de vida em uma comunidade costeira do Nordeste brasileiro. Metodologia: estudo epidemiológico, descritivo e transversal, realizado de modo não probabilístico entre março a junho de 2017, com 105 moradores da Ilha de Boipeba, localizada no Sul da Bahia. O exame parasitológico de fezes foi realizado pelos métodos de sedimentação espontânea, Baermann-Moraes e FAUST. Um questionário foi aplicado para avaliar o perfil sociodemográfico da população. Resultados: do total de indivíduos avaliados, 52,4% eram do sexo feminino e 57,1% tinham entre 15 a 59 anos. Todos os indivíduos possuíam água encanada, porém não tratada, enquanto 91,4% referiu ingerir vegetais crus e 45,7% não higienizavam as mãos antes as refeições. Sintomas gastrointestinais foram relatados em 82,8% dos indivíduos e infecções enteroparasitárias foram diagnosticadas em 69,6%. Os parasitos mais frequentemente encontrados foram Ancilostomídeo (18,1%) e Entamoeba coli (43,8%). O principal fator de risco potencial para contrair a infecção por ancilostomídeos foi a não existência de poço artesiano na residência (RP=4,35), enquanto para Trichuris trichiura foi não dispor de pia no banheiro (RP=3,82). Conclusão: a comunidade analisada apresentou elevada prevalência de enteroparasitoses. Os hábitos precários de higiene e de acesso à água tratada, associados às condições ambientais e climáticas do local, podem ter contribuído para a elevada transmissão de geohelmintos observada.

Introduction: Intestinal parasitic infections are an important public health problem worldwide. They are more prevalent in tropical regions impacting in morbidity and mortality and costs for the health system. Objective: To evaluate the prevalence of enteroparasitosis and its association with socioeconomic, sanitary and environmental conditions and lifestyle habits in a coastal community in the Northeast Brazil. Methodology: This is an epidemiological, descriptive and cross-sectional study, carried out in a non-probabilistic manner between March and June 2017, with 105 residents of Boipeba Island in the Southern Bahia. The parasitological examination of feces was carried out by the methods of spontaneous sedimentation, Baermann-Moraes and FAUST. A questionnaire was applied to assess the sociodemographic profile of the population. Results: Of the total of individuals evaluated, 52.4% were female and 57.1% were between 15 and 59 years old. All individuals had piped, but untreated water, while 91.4% reported eating raw vegetables and 45.7% did not wash their hands before meals. Gastrointestinal symptoms were observed in 82.8% individuals and 69.6% were diagnosed with enteroparasitic infections. The most frequent parasites were the hookworm (18.1%) and Entamoeba coli (43.8%). The main potential risk factor for hookworm infection was the non-existence of an artesian well in the residence (PR=4.35) and Trichuris trichiura it was not having a sink in the toilet (PR=3.82). Conclusion: The analyzed community has a high prevalence of enteroparasitosis, in addition to environmental and climatic conditions that contribute to the transmission of these infections.

Relação entre genótipo e insuficiência pancreática em crianças e adolescentes com fibrose cística de um centro de referência no Brasil / Relationship between genotype and pancreatic insufficiency in children and adolescents with cystic fibrosis in a referral center in Brazil

Introdução: fibrose cística (FC) é uma doença genética que culmina em alterações na proteína transmembrana CFTR, resultando na produção de muco mais espesso em diversos órgãos, destacando-se os tratos respiratório e digestório. A insuficiência pancreática (IP) acomete até 95% dos pacientes com FC. Objetivos: determinar a frequência de IP através da dosagem de elastase fecal-1 (EF-1) e compará-la com o genótipo de pacientes com FC assistidos em um centro de referência. Metodologia: foi realizado um estudo transversal, incluindo-se pacientes com FC de 0 a 20 anos. Após a inclusão dos sujeitos à pesquisa, foi realizada consulta ao prontuário para a obtenção de dados clinicos e demograficos e amostras de fezes foram obtidas para dosagem da (EF-1). Os pacientes foram submetidos à análise molecular das mutações por métodos convencionais, através da extração do DNA em sangue periférico. Quando duas mutações patológicas não foram identificadas, o sequenciamento de nova geração com utilização da plataforma Illumina HiSeq foi realizado em amostras da mucosa oral. Resultados: foram incluídos 31 pacientes, 17 (54,8%) do sexo feminino, mediana de idade de 10 anos, e apenas um paciente foi classificado como branco. Vinte e dois (70,9%) pacientes apresentaram dosagem de EF-1 inferior a 200 µg/g, compatível com o diagnóstico de IP. Destes, 21 (95,4%) apresentaram dosagem de EF-1 menor ou igual a 15µg/g, caracteristica de IP grave. Todos os pacientes com IP apresentavam duas mutações de classes I a III. Conclusão: a IP foi identificada em 70% dos pacientes, ocorrendo em todos os pacientes com duas mutações de classe I-III.

Introduction: cystic fibrosis (CF) is a genetic disease that culminates in alterations in the CFTR transmembrane protein, resulting in the production of thicker mucus in various organs, especially the respiratory and digestive tract. Pancreatic insufficiency (PI) affects up to 95% of CF patients. Objectives: To determine the frequency of PI by measuring fecal elastase-1 (FE-1) and comparing it with the genotype of CF patients assisted at a referral Center. Methodology: a cross-sectional study was conducted, including patients with CF from 0 to 20 years. After the inclusion of the subjects to the research, medical records were consulted to obtain clinical and demographic data and stool samples were obtained for the measurement of (FE-1). Patients were submitted to molecular analysis of mutations by conventional methods by DNA extraction in peripheral blood. When two pathological mutations were not identified, next-generation sequencing using the Illumina HiSeq platform was performed on oral mucosa samples. Results: thirty one patients were included, 17 (54.8%) female, median age 10 years, and only one patient was classified as white. Twenty-two (70.9%) patients had an FE-1 dosage of less than 200 µg / g, compatible with the diagnosis of pancreatic insufficiency (PI). Of these, 21 (95,4%) had an EF-1 dosage less than or equal to 15µg / g, characteristic of severe PI. All patients with two mutations class I to III were PI. Conclusion: PI was identified in 70% of patients, occurring in all patients with class I-III mutations.

Enteroparasitoses e aspectos socioeconômicos em pacientes alcoolistas / Intestinal parasites and socioeconomic aspects of alcoholic patients

Introdução: as enteroparasitoses constituem um problema de saúde pública que atinge as populações mais vulneráveis. O alcoolismo é um problema que afeta milhões de pessoas em todo o mundo, apresenta efeitos nocivos à saúde dos indivíduos e predispõe à infecção por S. stercoralis e às formas mais graves da estrongiloidíase. Objetivo: avaliar a prevalência da infecção das enteroparasitoses, bem como fatores socioeconômicos e sanitários de pacientes alcoolistas atendidos em um centro de tratamento especializado em Salvador, Bahia. Metodologia: trata-se de um estudo transversal, realizado com pacientes alcoolistas (n=277), do sexo masculino, atendidos em um centro de tratamento entre julho de 2014 e junho de 2017. O estudo foi realizado através da aplicação de um questionário estruturado para obtenção de dados socioeconômicos, demográficos e sanitários, sendo solicitadas, ainda, pelo menos duas amostras de fezes em dias alternados. O diagnóstico parasitológico foi realizado pelos métodos de sedimentação espontânea, Baermann-Moraes e cultura em placa de ágar. Resultados: a média de idade dos pacientes inclusos foi de 44,8 ± 9,5 anos. Verificouse que 35,7% dos pacientes estavam infectados com algum enteroparasito e, desses, 30,3% eram monoparasitados. Os parasitos mais frequentes foram S. stercoralis, Endolimax nana e ancilostomídeos, correspondendo 16,6%, 11,2% e 5,8%, respectivamente. Conclusão: dessa forma, S. stercoralis foi o parasito mais frequente, e a associação entre a infecção por esse parasito e o alcoolismo pode levar à estrongiloidíase grave. A elevada frequência de enteroparasitoses nesses pacientes, principalmente por protozoários, deve-se à ausência de higiene pessoal, pois esses indivíduos são suscetíveis à infecção oral fecal. A implementação de medidas de saneamento básico e de campanhas de conscientização para prevenção de infecções parasitárias é imprescindível para a saúde das populações mais vulneráveis.

Introduction: intestinal parasitoses are a public health issue that notably affects vulnerable populations. Alcoholism is a problem that affects millions worldwide by causing damaging effects to the health of individuals as it predisposes them to that infection through stercralisàs and more evolved forms of strongyloidiasis. Objective: evaluate the prevalence of intestinal parasite infections as well as socioeconomic and sanitation factors in a population of alcoholic patients at a specialized treatment facility in Salvador, Bahia. Methodology: this cross-sectional study was carried out with male alcoholic patients (n=277) at a treatment facility from July/2014 to June/2017. The research data were collected through a structured questionnaire aimed to obtain socioeconomic, demographic and sanitation information. Stool tests were ordered in alternate days. The parasitological diagnosis was based on methods of spontaneous sedimentation, Baermann-Moraes and Agar plate growth medium. Results: the patients' average age was 44,8 ± 9,5 years. A total of 35% of the patients was infected with a type of enteroparasite, of whom 30,3% was mono-infected. The most commonly found parasites were S. stercoralis, Endolimax nana and hookworm, corresponding to 16,6%, 11,2% e 5,8%, respectively. Conclusion: as such, S. Stercoralis was the most frequent parasite in this population and the association between the infection by this parasite and alcoholism may lead to severe strongyloidiasis. The high rates of enteroparasitism in those patients, particularly protozoa, are due to the lack of adequate personal hygiene, given those individuals are prone to acquire infections transmitted through the oral fecal route. An implementation of public health sanitation measures and the launch of public awareness campaigns in order to prevent parasite infections are vital to the health of vulnerable populations.

Ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em caprinos do semiárido baiano / Occurrence of antibodies to Toxoplasma gondii in the Bahia semi-arid goats

Este trabalho teve como objetivo avaliar a frequência de anticorpos IgG específicos contra Toxoplasma gondii em caprinos pertencentes a algumas cidades do semiárido baiano, através do ELISA (ensaio imunoadsorvente ligado à enzima) indireto. Primeiramente, foi realizado um estudo piloto com 49 caprinos para comparar os resultados do ELISA com a RIFI (reação de imunofluorescência indireta) para detecção de anticorpos séricos contra T. gondii. Foram observados 30,6% (15/49) de soropositivos pelo ELISA, enquanto pela RIFI houve 40,8% (20/49) de caprinos reagentes. Desta maneira, o ELISA apresentou 70% de sensibilidade e 96,5% de especificidade. Em seguida, foram analisadas amostras de soros de caprinos provenientes das cidades de Casa Nova, Curaçá, Jaguarari, Juazeiro, Sento Sé e Uauá. Dentre os 375 animais avaliados, 25,1% apresentaram títulos de IgG positivos no ELISA para T. gondii. As fêmeas tiveram um risco 1,236 vezes maior de serem soropositivas em relação aos machos. Não houve relação entre idade e presença de anticorpos anti-T. gondii nestes animais. A cidade com maior número de caprinos soropositivos foi Sento Sé, com 46,4% (39/84) e a menor frequência foi observada em Juazeiro, com 3,6% (2/55). Os resultados deste estudo confirmam que a infecção pelo T. gondii é comum em caprinos brasileiros do estado da Bahia, inclusive na região de clima semiárido, considerada mais desfavorável à transmissão

The objective of this study was to evaluate the frequency of specific IgG antibodies against Toxoplasma gondii in goats belonging to some cities of Semi-Arid region of Bahia, by indirect ELISA (enzyme linked immunonosorbent assay). First, a pilot study was conducted with 49 goats to compare results from ELISA with those obtained by IFAT (indirect fluorescent antibody test) to detect serum antibodies against T. gondii. It was observed 30.6% (15/49) of seropositive by ELISA, while the IFAT showed 40.8% (20/49) reagents goats. Thus, ELISA showed 70% sensitivity and 96.5% specificity. Then, sera samples of goats from the cities Casa Nova, Curaçá, Jaguarari, Juazeiro, Sento Sé and Uauá were analyzed. Among the 375 evaluated animals, 25.1% had positive IgG titers in ELISA for T. gondii. Females have a 1.236 times higher risk of being seropositive compared to males. There was no correlation between age and the presence of anti-T. gondii antibodies in these animals. The city with the biggest number of seropositive goats was Sento Sé, with 46.4% (39/84) and the lowest rate was observed in Juazeiro, with 3.6% (2/55). The results of this study confirm that T. gondii infection is common in goats from the semi-arid climate region of Bahia, which is considered adverse for transmission

Avaliação da frequência de parasitos intestinais e do estado nutricional em escolares de uma area periurbana de Salvador, Bahia, Brasil / Evaluation of intestinal parasitic infections prevalence and nutritional status of school children from a peri-urban area of Salvador, Bahia, Brazil

A elevada prevalência de parasitos intestinais nos países subdesenvolvidos se deve, principalmente, às precárias condições de saneamento básico e ao baixo nível de escolaridade da população. Este trabalho avaliou a associação entre frequência dos parasitos intestinais e estado nutricional e também o perfil socioeconômico dos alunos da primeira à quarta série de uma escola municipal do bairro Jardim Valéria, subúrbio de Salvador, Bahia, Brasil. A análise parasitológica foi realizada em 200 estudantes pelo método de Hoffman-Pons-Janer. O estado nutricional foi avaliado segundo a classificação de Waterlow, utilizando-se a curva padrão adotada pelo National Center of Health Statistic. Os resultados demonstraram uma prevalência de 94por cento (188/200) de infecção porenteroparasitos, sendo a faixa etária mais atingida a de 6 a 9 anos. Os parasitos com frequência mais elevada foram: Entamoeba coli (43,5por cento), Ascaris lumbricoides (25por cento), Endolimax nana (22por cento) eEntamoeba histolytica/E. dispar (21,5por cento). Em relação à diversidade de parasitos, 39por cento das crianças infectadas apresentavam monoparasitismo; 33por cento, biparasitismo e 22por cento, multiparasitismo. A análise do estado nutricional de 147 alunos na faixa etária de 6 a 10 anos mostrou que 15por cento tinham déficit nutricional. No entanto, não foi demonstrada uma correlação positiva entre crianças parasitadas edéficit nutricional, em razão da elevada frequência de crianças parasitadas (78,9por cento) classificadas como eutróficas. Os dados deste estudo confirmam a elevada prevalência de parasitos intestinais e má nutrição entre os escolares de populações de baixa renda. Em consequência, destaca-se aimportância de programas de educação em saúde para prevenção de infecções parasitárias e da adoção de medidas que melhorem o estado nutricional das crianças.

An experimental protocol for the establishment of dogs with long-term cellular immune reactions to Leishmania antigens

Domestic dogs are considered to be the main reservoirs of zoonotic visceral leishmaniasis. In this work, we evaluated a protocol to induce Leishmania infantum/Leishmania chagasi-specific cellular and humoral immune responses in dogs, which consisted of two injections of Leishmania promastigote lysate followed by a subcutaneous inoculation of viable promastigotes. The primary objective was to establish a canine experimental model to provide positive controls for testing immune responses to Leishmania in laboratory conditions. After inoculation of viable promastigotes, specific proliferative responses of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) to either Leishmania lysate or recombinant proteins, the in vitro production of interferon-γ by antigen-stimulated PBMCs and a significant increase in circulating levels of anti-Leishmania antibodies were observed. The immunized dogs also displayed positive delayed-type hypersensitivity reactions to Leishmania crude antigens and to purified recombinant proteins. An important finding that supports the suitability of the dogs as positive controls is that they remained healthy for the entire observation period, i.e., more than seven years after infection. Following the Leishmania antigen lysate injections, the infection of dogs by the subcutaneous route appears to induce a sustained cellular immune response, leading to an asymptomatic infection. This provides a useful model for both the selection of immunogenic Leishmania antigens and for immunobiological studies on their possible immunoprotective activities.

Proteínas recombinantes de amastigotas de Leishmania infantum/chagasi. Desenvolvimento/otimização de metodologias de obtenção e avaliação de antigenicidade / Recombinant proteins of amastigotes of Leishmania infantun/chagasi. Development/optimization of attainment methodologies and evaluation of antigenecity

O programa de controle da leishmaniose visceral no Brasil, através da eliminação de cães infectados com Leishmania, não produziu resultados satisfatórios. Além da baixa sensibilidade dos métodos diagnósticos empregados e a demora entre detecção e a eliminação de cães soropositivos, este tipo de medida enfrenta a pouca aceitação por médicos veterinários e donos dos cães. Apesar do encontro de cães na área endêmica com perfil de resistência à infecção por Leishmania, sugerindo que uma vacina é possível, até o presente momento não estão disponíveis vacinas humanas ou para uso veterinário, com eficácia comprovada. Este estudo teve como objetivo a padronização ou desenvolvimento de metodologias para a obtenção e avaliação de proteínas recombinantes de amastigotas de Leishmania infantum/chagasi, potencialmente candidatas a componentes de ensaios sorológicos para diagnóstico da LV humana e/ou canina ou de uma vacina para cães contra a infecção por L. infantum/chagasi. Inicialmente foi estabelecida a melhor condição de cultivo axênico para obtenção de amastigotas extracelulares de três espécies distintas de Leishmania. Apesar de morfologicamente semelhantes às formas amastigotas intracelulares, as formas axênicas de L. infantum/chagasi não apresentaram homogeneidade quanto à viabilidade e infectividade, contrastando com o observado com as espécies L. braziliensis e L. amazonensis. Dessa forma, amastigotas purificados de baço de hamsters infectados foram utilizados para purificação do RNA e produção de uma biblioteca de cDNA de L. infantum/chagasi. Cinco antígenos recombinantes diferentes foram selecionados da biblioteca de cDNA através do uso de uma mistura de soros de cães ou de pacientes com leishmaniose visceral. Soros humanos não reativos a esses antígenos foram utilizados para identificar novos clones recombinantes, constituindo uma nova abordagem para obtenção de antígenos com potencial de aumentar a especificidade de um ensaio imunodiagnóstico. A adição dos novos antígenos elevou significativamente a sensibilidade de um ensaio “dipstick” utilizado para o diagnóstico da leishmaniose visceral humana em relação a um painel limitado de soros...